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    淺析對抑郁模型小鼠強迫游泳實驗方法的探討

    日期:2022-06-10 17:33
    瀏覽次數:637
    摘要: 抑郁癥是一種包括多種精神和軀體癥狀的情感 性精神障礙, 發病率 3% ~ 5%, Zi殺率 12% ~ 14% , 并有逐年上升趨勢, 嚴重危害人類健康。抑郁癥動物模型對抗抑郁藥的研究和開發具有至關重 要的作用。本研究采用的小鼠強迫游泳實驗快速、 簡便, 是具有較高可信度的模型之一, 廣泛用于抗抑郁藥的篩選和評價。但是, 目前實驗方法學和文獻對小鼠強迫游泳的實驗條件的報道并不統一, 給后來的研究帶來困惑。為此, 本研究選定3 種基本 的實驗條件即預先訓練、體重和水深, 觀察其對雄性 ICR 小鼠強迫游泳實驗的敏感性是否有差別, 對實 驗結果是否有...

    抑郁癥是一種包括多種精神和軀體癥狀的情感 性精神障礙, 發病率 3% ~ 5%, Zi殺率 12% ~ 14%  , 并有逐年上升趨勢, 嚴重危害人類健康。抑郁癥動物模型對抗抑郁藥的研究和開發具有至關重 要的作用。本研究采用的小鼠強迫游泳實驗快速、 簡便, 是具有較高可信度的模型之一, 廣泛用于抗抑郁藥的篩選和評價。但是, 目前實驗方法學和文獻對小鼠強迫游泳的實驗條件的報道并不統一, 給后來的研究帶來困惑。為此, 本研究選定3 種基本 的實驗條件即預先訓練、體重和水深, 觀察其對雄性 ICR 小鼠強迫游泳實驗的敏感性是否有差別, 對實 驗結果是否有影響。

     

    一、實驗準備及流程方法


    1、動物 


    ICR 小鼠, 雄性, 體重( 20~ 24 g 和 24~ 28 g) , 由北京大學醫學部實驗動物中心提供。合格 證號: SCXK( 京) 2002- 0001。飼養室溫( 22度左右)  , 自然光照, 實驗前12 h 禁食, 不禁水。 


    2、方法 


    小鼠強迫游泳實驗: 將小鼠放入高 20 cm、直徑14 cm 的圓柱形玻璃缸中, 每缸 1 只, 缸中 水深根據實驗要求分別采用 6 cm、10 cm 和 15 cm, 水溫( 25 度以內)  , 訓練組小鼠實驗前訓練游泳 15 min, 隨后取出放回籠中, 24 h 后進行實驗。實驗前 30 min 給藥組腹腔注射不同劑量的鹽酸丙咪嗪, 對 照組腹腔注射蒸餾水。實驗時, 小鼠在缸中游泳 6 min, 記錄后 4 min 內小鼠的累計不動時間。不動時 間( immobility time) 是指小鼠在水中停止掙扎、呈漂 浮狀態, 或僅有細小的肢體運動以保持頭部浮在水面。


    二、實驗結果


    1、預先訓練對小鼠強迫游泳實驗結果的影響 小鼠體重 20~ 24 g, 水深 10 cm。在強迫游泳實驗 中, 實驗前 24 h 經 15 min 游泳訓練的小鼠中, 給藥 組( 鹽酸丙咪嗪 10 mgkg- 1 ) 的不動時間比對照組短 ( P < 0. 05) ; 而未經游泳訓練的小鼠中, 給藥組的 不動時間與對照組相似( P > 0. 05) 。見表 1。


    2、體重對小鼠強迫游泳實驗結果的影響 


    小鼠 實驗前 24 h 進行 15 min 游泳訓練, 水深 10 cm。體 重 20 ~ 24 g 小 鼠中, 給 藥組 ( 鹽 酸 丙咪 嗪 10 mgkg- 1 ) 的不動時間比對照組短( P < 0. 01) 。而 體重 24~ 28 g 的小鼠中, 給藥組與對照組相似( P > 0. 05) 。見表 2。


    3、水深對強迫游泳實驗結果的影響 


    小鼠體重 20~ 24 g, 測試前 24 h 均給予 15 min 游泳訓練, 訓練 時的水深與實驗時的水深一致。在水深 6 cm 和水 深 15 cm 時, 僅鹽酸丙咪嗪 10 mgkg- 1組的不動時 間比對照組短; 而在水深10 cm 時, 鹽酸丙咪嗪5 mg kg- 1和 10 mgkg- 1組不動時間均比對照組短, 且似 呈劑量依賴性。見表 3。

    三、實驗注意事項


     小鼠強迫游泳實驗是 Porsolt 于 1977 年創建的 一種抑郁癥動物模型 。實驗中, 小鼠被迫在一個 局限的空間內游泳, 它們首先試圖逃跑, 隨后處于一 種漂浮不動狀態, 放棄逃脫的希望, 即行為絕望 ( behavioral despair) 。目前普遍認為, 這種行為絕望 ( 小鼠在強迫游泳期間的不動時間) 類似于人類抑郁 癥的成分。臨床有效的抗抑郁藥可縮短小鼠的 不動時間, 而已知的能導致人抑郁的藥wu則增加小 鼠的不動時間。


    因為小鼠的行為實驗結果變異較大, 除種屬差 異外, 與實驗過程的條件不同有很大關系。ICR 小鼠作為國際公認的實驗動物與以前經常應用的昆 明種小鼠比較, 體型小、敏感性較高、游泳不動時間 短 。我們在實驗中也發現 ICR 小鼠具有活躍、 好動的特點。經游泳訓練后強迫游泳實驗模型易于 建立, 而且標準差小, 給藥組與對照組相比差異有顯 著性。本研究采用抗抑郁藥鹽酸丙咪嗪, 實驗結果顯示: 在強迫游泳實驗中, 實驗前 24 h 經 15 min 游 泳訓練的 ICR 雄性小鼠, 給藥組比對照組不動時間 短, 而未經訓練的 2 組小鼠間差異無顯著性。


    實驗結果還表明: 體重 20~ 24 g 的 ICR 小鼠中 給藥組的不動時間與對照組相比差異有顯著性, 而 體重 24~ 28 g 的 2 組小鼠的不動時間相似。體重較 大, 在游泳時浮力也較大, 更易表現為不動狀態, 使 藥wu的作用變得不敏感。


    在強迫游泳實驗中, 水的深度是關鍵, Zui好使動 物后爪剛觸及水底, 但又不能支撐身體為宜。在 水深 6 cm 時, 由于水淺, 部分小鼠不僅后爪可觸及 水底, 再加上鼠尾在水缸底部的支撐, 影響了不動時 間的測定。在水深 15 cm 時, 小鼠的后爪和尾部均 不能觸及水底。而在 10 cm 時, 避免了上述 2 種情 況對結果的影響。


    因此, 做小鼠強迫游泳實驗時, 以選擇體重 20 ~ 24 g 的 ICR 雄性小鼠, 實驗前24 h 進行 15 min 的 游泳訓練, 且水深為 10 cm 為宜。

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